Giunsa mahibal-an ang labing kaayo nga konsentrasyon?
Alang sa inducer IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), mas taas ang konsentrasyon, mas maayo.Ang kamalaumon nga konsentrasyon nagdepende sa piho nga mga kondisyon sa eksperimento ug ang gitinguha nga epekto sa induction.
Kasagaran, ang konsentrasyon sa IPTG gigamit sa sakup nga 0.1-1 mM.Ang ubos nga konsentrasyon makapakunhod sa dili maayo nga mga epekto sa pagtubo sa selula ug makapakunhod sa cytotoxicity tungod sa sobra nga pagpahayag sa mga target nga protina.Ang mas taas nga konsentrasyon mahimong hinungdan sa sobra nga kabug-at sa metabolismo sa selula, nga makaapekto sa pagtubo sa selula ug kahusayan sa ekspresyon.
Ang paagi aron mahibal-an ang kamalaumon nga konsentrasyon mao ang pagtimbang-timbang sa lebel sa ekspresyon sa target nga protina pinaagi sa pagpahigayon sa mga pagsulay sa induction sa IPTG sa lainlaing mga konsentrasyon.Ang gagmay nga mga pagsulay sa kultura mahimong ipahigayon gamit ang usa ka lainlaing mga konsentrasyon sa IPTG (eg 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ug uban pa) ug ang epekto sa ekspresyon sa lainlaing mga konsentrasyon mahimong masusi pinaagi sa pag-ila sa lebel sa ekspresyon sa target nga protina (eg Western. blot o fluorescence detection).Sumala sa mga resulta sa eksperimento, ang konsentrasyon nga adunay labing maayo nga epekto sa ekspresyon gipili ingon nga labing maayo nga konsentrasyon.
Dugang pa, mahimo ka usab nga maghisgot sa may kalabutan nga literatura o ang kasinatian sa ubang mga laboratoryo aron masabtan ang sagad nga gigamit nga range sa konsentrasyon sa IPTG ubos sa parehas nga mga kondisyon sa eksperimento, ug dayon i-optimize ug i-adjust sumala sa mga panginahanglanon sa eksperimento.
Mahinungdanon nga timan-an nga ang kamalaumon nga konsentrasyon mahimong magkalainlain depende sa lainlaing mga sistema sa ekspresyon, target nga protina, ug mga kondisyon sa eksperimento, mao nga labing maayo nga ma-optimize sa usa ka kaso matag kaso.
Oras sa pag-post: Sep-28-2023