Ang Dithiothreitol (DTT) kay kasagarang gigamit nga reducing agent, nailhan usab nga bag-ong green additive.Kini usa ka gamay nga molekular nga organikong compound nga adunay duha ka mercaptan nga grupo (-SH).Tungod sa pagkunhod sa mga kabtangan ug kalig-on niini, ang DTT kaylap nga gigamit sa biochemistry ug molecular biology nga mga eksperimento.
Ang nag-unang papel sa DTT mao ang pagpakunhod sa disulfide bonds sa mga protina ug uban pang biomolecules.Ang disulfide bond usa ka importante nga bahin sa pagpilo ug kalig-on sa protina, apan ubos sa pipila ka mga eksperimento nga kondisyon, sama sa reducible SDS-PAGE nga pag-analisa, pag-recombination sa protina ug pagpilo, gikinahanglan nga pakunhuran ang disulfide bond ngadto sa duha ka grupo sa thiol aron mabungkag ang spatial nga istruktura sa ang protina.Ang DTT mahimong mo-react sa disulfide bonds aron makunhuran kini ngadto sa mercaptan nga mga grupo, sa ingon magbukas sa spatial nga istruktura sa protina ug makapasayon sa pag-analisar ug pagmaniobra.
Ang DTT mahimo usab nga gamiton aron mapanalipdan ang kalihokan ug kalig-on sa enzyme.Sa pipila ka enzyme-catalyzed nga mga reaksyon, ang kalihokan sa enzyme mahimong mapakunhod sa oxidant.Ang DTT mahimong mo-react sa mga oxidant aron makunhuran kini sa dili makadaot nga mga substansiya, sa ingon mapanalipdan ang kalihokan ug kalig-on sa enzyme.
Kung itandi sa tradisyonal nga mga ahente sa pagkunhod sama sa β-mercaptoethanol (β-ME), ang DTT giisip nga usa ka mas luwas ug mas lig-on nga ahente sa pagkunhod.Dili lamang kini lig-on sa tubigon nga solusyon, apan gipadayon usab ang pagkunhod sa mga kabtangan sa ilawom sa taas nga temperatura ug mga kondisyon sa acid-base.
Ang paggamit sa DTT medyo yano.Sa kinatibuk-an, ang DTT matunaw sa usa ka angay nga buffer ug dayon idugang sa eksperimento nga sistema.Ang kamalaumon nga konsentrasyon sa DTT kinahanglan nga matino sumala sa piho nga eksperimento, ug sa kasagaran gigamit sa han-ay sa 0.1-1mM.Ang ubos nga konsentrasyon makapakunhod sa dili maayo nga mga epekto sa pagtubo sa selula ug makapakunhod sa cytotoxicity tungod sa sobra nga pagpahayag sa mga target nga protina.Ang mas taas nga konsentrasyon mahimong hinungdan sa sobra nga kabug-at sa metabolismo sa selula, nga makaapekto sa pagtubo sa selula ug kahusayan sa ekspresyon.
Ang paagi aron mahibal-an ang kamalaumon nga konsentrasyon mao ang pagtimbang-timbang sa lebel sa ekspresyon sa target nga protina pinaagi sa pagpahigayon sa mga pagsulay sa induction sa IPTG sa lainlaing mga konsentrasyon.Ang gagmay nga mga pagsulay sa kultura mahimong ipahigayon gamit ang usa ka lainlaing mga konsentrasyon sa IPTG (eg 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ug uban pa) ug ang epekto sa ekspresyon sa lainlaing mga konsentrasyon mahimong masusi pinaagi sa pag-ila sa lebel sa ekspresyon sa target nga protina (eg Western. blot o fluorescence detection).Sumala sa mga resulta sa eksperimento, ang konsentrasyon nga adunay labing maayo nga epekto sa ekspresyon gipili ingon nga labing maayo nga konsentrasyon.
Dugang pa, mahimo ka usab nga maghisgot sa may kalabutan nga literatura o ang kasinatian sa ubang mga laboratoryo aron masabtan ang sagad nga gigamit nga range sa konsentrasyon sa IPTG ubos sa parehas nga mga kondisyon sa eksperimento, ug dayon i-optimize ug i-adjust sumala sa mga panginahanglanon sa eksperimento.
Mahinungdanon nga timan-an nga ang kamalaumon nga konsentrasyon mahimong magkalainlain depende sa lainlaing mga sistema sa ekspresyon, target nga protina, ug mga kondisyon sa eksperimento, mao nga labing maayo nga ma-optimize sa usa ka kaso matag kaso.
Sa katingbanan, ang DTT usa ka sagad nga gigamit nga ahente sa pagkunhod nga magamit aron makunhuran ang mga gapos sa disulfide sa mga protina ug uban pang mga biomolekul ug aron mapanalipdan ang kalihokan ug kalig-on sa enzyme.Kini kaylap nga gigamit sa biochemistry ug molecular biology nga mga eksperimento.
Oras sa pag-post: Sep-28-2023